即采用遗传育种的方法,使菌株(从自然界分离筛选而得的出发菌株)的遗传因子 dna发生突变、重组,从而从中选出产量高、成品---或具有新的培养特性如耐产物抑制、能利用廉价原料以及具有生产新品种能力的优良菌种。采用的方法有诱变育种、杂交育种、细胞融合技术和重组dna技术。诱变育种是利用诱变因子如紫外线、钴-60、乙烯类等物理或化学诱变剂处理生产菌株的单孢子悬浮液,以获得诱发突变株。随后进行突变株的筛选,从中筛选高产菌株。由于随机的突变群体中,低温生物菌种,有益突变所占比例很低,要获得高产突变株必须进行大量筛选。可根据生物合成途径中的反应点,并通过它们的改变以提高产率或其他特性,如选育抗产物反馈抑制的突变株、增加细胞透性的突变株及营养缺陷型的突变株等。这种理性筛选法广泛应用于---酸产生菌的选育。
此方法是很常用的,广泛适用于---、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜用冷冻干燥保藏的菌种。
此方法的缺点是菌株仍有一定程度的代谢活动能力,保藏期短,传代次数多,菌种较容易发生变异和被污染。
正常情况下的保菌期:霉菌和有芽孢的---一般可保存6个月左右,无芽孢的---可保存1个月左右,酵母菌可保存3个月左右。
1.冷冻真空干燥法。将已培养、生长丰富的菌体或孢子悬浮于灭菌的、卵白、脱脂奶制成菌悬液,将悬液以无菌操作分装于灭菌的玻璃安瓿瓶中,低温生物菌种厂家,每管约0.3-0.5毫升,然后用耐压橡皮管与冷冻干燥装置连接,安瓿瓶放在冷冻槽中于-30℃至-40℃迅速冷冻,并在冷冻状态下抽空干燥,并在真空状态下熔封安瓿,在-20℃保存,一般可保存十年以上,但成本较高。
2.液氮---温保藏法。首先将要保藏的菌种制成菌悬液备用;其次,准备安瓿瓶,低温生物菌种多少钱,每瓶加入0.8毫升冷冻保护剂10%(体积比)甘油蒸馏水溶液,塞棉塞灭菌(1公斤/平方厘米,5分钟)。无菌检查后,接入要保藏的菌种,火焰熔封瓶口,检查是否漏气,将封好口的安瓿瓶放在---器内,以每分钟下降1℃的速度缓慢降温,使保藏品逐步均匀地---,低温生物菌种,直至-35℃,以后---速度就不需控制,安瓿---后立即放入液氮罐内,在-150至-196℃保藏,该法只有少数科研院所使用。
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