流程
4.1 优良糖化酶菌株的分离与筛选
融化培养基***倒平板***打散孢子团粒***梯度稀释***涂布平板***培养观察***滴加碘液***挑菌落***接种***培养***糖化酶活力测定***菌种保存
4.2 酸乳制品中的乳酸菌的分离
制培养基***倒平板***梯度稀释***涂布平板***培养观察***挑菌落***接牛乳管***培养观察***传代培养***挑选凝乳管***乳酸测定***菌种保存
5 步骤
优良糖化酶菌株的分离与筛选
(1)融化淀粉察氏培养基,稍冷后倒平板与斜面数个。
(2)取种曲少许,加入10ml带玻璃球的无菌生理盐水的三角瓶中,用力振荡打散孢子团粒,使之形成均匀的孢子悬浮粒。然后将其用无菌纱布过滤于无菌试管中。
(3)将上述滤液以10倍稀释法知释至10-7,取后3个稀释度的稀释液各0.2ml,低温生物菌种,于淀粉察氏培养基平板上用无菌涂布器分别依次涂布2至3个皿,30℃培养1~2d。
(5)性能测定:测定各菌落的糖化酶活力。
实验室菌种的传代保藏过程
1. 按菌种说明书要求复溶菌粉,转种于适当的增菌培养基内(g1),复壮后转接至平板上,并于适当温度下培养适当时间,低温生物菌种,分离出单个纯种菌落,此为第2代(g2)。
2. 菌种鉴定完成后,挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管,低温生物菌种价格,同时挑取纯菌落转接斜面菌种作为工作用菌种。此时,保藏菌种为第2代,但工作用菌种则为第三代。
3. 将第2代菌种管冷冻保存,将工作用菌种于适当温度下培养适当时间后可用于试验。
4. 取一支冷冻保存的g2代菌种转种于平板和斜面培养基上,平板上的菌种制成冷冻保藏管第三代(g3),斜面培养基经适当温度下培养适当时间后用作工作用菌种(w3)。
5. 将第三代菌种(g3)冷冻或低温保存,将生长、转种后的g2菌种经灭菌处理后丢弃。
6. 当工作用菌种代数小于5时,可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种,如w3可直接转接为w4。
7. 按上述程序操作,直至g4转为w5为止,需重新开启安瓿,再重复上述操作程序、保藏和使用菌种。
以上方法中,菌种被分为两类。传代用菌种和工作用菌种,低温生物菌种公司,传代用菌种用于甘油冷冻管法保藏,工作用菌种用斜面低温保藏法保藏。
实验证明,甘油冷冻管的有效期至少为2年,但其主要适用于---(需氧)、酵母菌的传代、保藏、---和芽孢类---则需应用其它方法。
1、传代培养保藏法:包括又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等,培养后于4-6℃冰箱内保存。
2、液体石蜡覆盖保藏法:液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间。
3、载体保藏法:载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法。
4、寄主保藏法:寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物。
5、冷冻干燥保藏法:先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥),其中真空冷冻干燥法常见。
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