实验室菌种的传代保藏过程
1. 按菌种说明书要求复溶菌粉,转种于适当的增菌培养基内(g1),复壮后转接至平板上,并于适当温度下培养适当时间,分离出单个纯种菌落,此为第2代(g2)。
2. 菌种鉴定完成后,挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管,同时挑取纯菌落转接斜面菌种作为工作用菌种。此时,保藏菌种为第2代,但工作用菌种则为第三代。
3. 将第2代菌种管冷冻保存,将工作用菌种于适当温度下培养适当时间后可用于试验。
4. 取一支冷冻保存的g2代菌种转种于平板和斜面培养基上,低温生物菌种,平板上的菌种制成冷冻保藏管第三代(g3),斜面培养基经适当温度下培养适当时间后用作工作用菌种(w3)。
5. 将第三代菌种(g3)冷冻或低温保存,将生长、转种后的g2菌种经灭菌处理后丢弃。
6. 当工作用菌种代数小于5时,可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种,如w3可直接转接为w4。
7. 按上述程序操作,低温生物菌种厂家,直至g4转为w5为止,需重新开启安瓿,再重复上述操作程序、保藏和使用菌种。
以上方法中,菌种被分为两类。传代用菌种和工作用菌种,传代用菌种用于甘油冷冻管法保藏,工作用菌种用斜面低温保藏法保藏。
实验证明,甘油冷冻管的有效期至少为2年,但其主要适用于---(需氧)、酵母菌的传代、保藏、---和芽孢类---则需应用其它方法。
退化(degeneration):菌种在培养或保藏过程中,由于自发突变的存在,出现某 些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象,称为菌种的退化。菌种退化不是突然发生的,而是从量变到---的逐步演变过程。开始时,在群体细胞中仅有个别细胞发生自发突变(一般均为负变),不会使群体菌株性能发生改变。经过连续传代,群体中的负变个体达到一定数量,发展成为优势群体,低温生物菌种多少钱,从而使整个群体表现为---的退。经分析发现,导致这一现象的原因有以下几方面。
1. 基因突变:1.有关基因发生负突变导致菌种退化 菌种退化的主要原因是有关基因的负突变。如果控制产量的基因发生负突变,则表现为产量下降;如果控制孢子生成的基因发生负突变,则产生孢子的能力下降。菌种在移种传代过程中会发生自发突变。虽然自发突变的几率很低(一般为10-6~10-9),尤其是对于某一特定基因来说,突变频率---。但是由于微生物具有---的代谢繁殖能力,随着传代次数增加,退细胞的数目就会不断增加,在数量上逐渐---势,成为一株退化了的菌株。
2.表型---造成菌种退化 表型---现象也会造成菌种退化。如,在诱变育种过程中,经常会发现某菌株初筛时产量较高,进行复筛时产量却下降了。
筛选:工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛,挑选具有某种能力的有用菌种。
分离:首先是从土壤或腐生植物中收集含菌样品,用无菌水稀释后,涂布于置有适宜---、霉菌生长的琼脂培养基平皿上,并将其倒置于恒温箱中,培养一定时间,平皿上长出的许多单个菌落(单一微生物的集落)经分别分离后即为各种纯种菌株,简称纯种,移种至试管斜面培养基上,置4℃冰箱备用。
筛选模型:根据不同的筛选目的,采用不同的筛选模型。如常规筛选菌种的方法是将土壤中分离所得的纯种,在含有琼脂培养基的平皿上培养后,用打孔器将菌块移至含有试验菌的琼脂培养基上,在适宜的温度下培养一定时间后取出,如在菌块的周围有透明的---圈,则表明此菌种具有产生抑制试验菌生长的菌种物质的能力。所得菌种经过摇瓶液体发酵,测定发酵液或菌丝体内菌种的含量,低温生物菌种报价,选出生产能力高的菌种。另一方面对所提取的菌种进行结构分析、药理试验及---试验等,确为有效者,即可作为生产菌种。又如筛选脂肪酶生产菌种的方法是将分离所得的霉菌涂布于含有牛脂的琼脂培养基上,恒温培养一定时间,如菌落周围出现透明圈的,则该菌具有分解脂肪的能力,进一步作摇瓶发酵测定酶活力,挑选产量高者作生产菌种的出发菌株。
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