研究在低温条件下生命活动的生物化学规律的新兴学科,是低温生物学的重要基础。例如,在某些冬眠状态的昆虫---中,甘油含量可---25%,以致在-35℃的状况下也不会冰冻。另一方面,利用低温下变化减慢,来研究在常温下变化较快的一些生物化学反应。如在酶的催化、蛋白质和---在溶液中的空间构象变化中。某些中间变化常温下在千分之一秒的时间内即可完成,用一般方法难以探讨,而在含有添加剂使温度降至-40℃左右的溶液中,低温生物菌种,反应速度大为减慢就可用常规方法进行研究。
(1)准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造,形状可用长颈球形底的,亦称泪滴型安瓿管(图ⅶ-15),大小要求外径6-7.5mm,低温生物菌种报价,长105mm,球部直径9-11mm,壁厚0.6-1.2mm。也可用没有球部的管状安瓿管。塞好棉塞,1.05kg/cm2>;,121.3℃灭菌30分钟,备用。
(2)准备菌种,用冷冻干燥法保藏的菌种,其保藏期可达数年至十数年,低温生物菌种多少钱,为了在许多年后不出差错,故所用菌种要---注意其纯度,即不能有杂菌污染,然后在适培养基中用适温度培养,使培养出---的培养物。---和酵母的菌龄要求超过对数生长期,低温生物菌种,若用对数生长期的菌种进行保藏,其存活率反而降低。一般,---要求24-48小时的培养物;酵母需培养3天;形成孢子的微生物则宜保存孢子;线菌与丝状---则培养7-10天。
(3)制备菌悬液与分装以---斜面为例,用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中,制成浓菌液,每支安瓿管分装0.2ml。
(4)冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售,价值昂贵,此处介绍的是简易方法与装置,可达到同样的目的。
将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻,无低温冰箱可用冷冻剂如干冰(固体co2>;)酒精的液或干冰酮液,温度可达-70℃。将安瓿管插入冷冻剂,只需冷冻4-5分钟,即可使悬液结冰。
低温生物菌种都是需要保护剂的,动物细胞也可以。---结构问题使得它比较容易保存,只用加10%左右的甘油就可以在-20摄氏度保存。动物细胞需要加dmso等,并且需要放到-80或者液氮才行冷冻保藏是指将菌种于-20℃以下的温度保藏,通过冷冻,使微生物代谢活动停止。就是通过低温来抑制微生物的生命活动,在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素。
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