实验室菌种的传代保藏过程
1. 按菌种说明书要求复溶菌粉,转种于适当的增菌培养基内(g1),复壮后转接至平板上,并于适当温度下培养适当时间,分离出单个纯种菌落,此为第2代(g2)。
2. 菌种鉴定完成后,挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管,同时挑取纯菌落转接斜面菌种作为工作用菌种。此时,保藏菌种为第2代,但工作用菌种则为第三代。
3. 将第2代菌种管冷冻保存,低温生物菌种多少钱,将工作用菌种于适当温度下培养适当时间后可用于试验。
4. 取一支冷冻保存的g2代菌种转种于平板和斜面培养基上,平板上的菌种制成冷冻保藏管第三代(g3),斜面培养基经适当温度下培养适当时间后用作工作用菌种(w3)。
5. 将第三代菌种(g3)冷冻或低温保存,将生长、转种后的g2菌种经灭菌处理后丢弃。
6. 当工作用菌种代数小于5时,可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种,低温生物菌种,如w3可直接转接为w4。
7. 按上述程序操作,直至g4转为w5为止,需重新开启安瓿,再重复上述操作程序、保藏和使用菌种。
以上方法中,菌种被分为两类。传代用菌种和工作用菌种,传代用菌种用于甘油冷冻管法保藏,工作用菌种用斜面低温保藏法保藏。
实验证明,甘油冷冻管的有效期至少为2年,但其主要适用于---(需氧)、酵母菌的传代、保藏、---和芽孢类---则需应用其它方法。
微生物对温度的要求不同与它们的膜结构物理化学性质有密切关系 根据细胞膜的液体镶嵌模型,细胞在正常生理条件下,膜中的脂质成分应保持液晶状态,只有当细胞膜处于液晶状态,才能维持细胞的正常生理功能,使细胞处于生长状态微生物的生长温度与细胞膜的液晶温度范围相一致。
通过对嗜冷酶的蛋白质模型和x一射线衍射分析表明,嗜冷酶分子间的作用力减弱,与溶剂的作用加强,酶结构的柔韧性增加,使酶在低温下容易被底物---产生催化作用。
2、蛋白质合成
3、合成冷蛋白
低温微生物适应低温的另一机制是合成冷休蛋白 将大肠菌从370c突然转移到100c条件时细胞中会---合成一组冷休蛋白,它们对低温的生理适应过程中发挥着重要作用,检测嗜冷酵母的冷休反应,发现冷---后冷休蛋白在很短时间内大量产生。 耐冷菌由于生活在温度波动的环境中,它们必须忍受温度的快速降低,低温生物菌种,这与它们产生的冷休蛋白是密切相关的。
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