无论采用何种保藏方法,首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行保藏,保藏它们的休眠体,如分生孢子、芽孢等。其次,应根据微生物生理、生化特点,人为地创造环境条件,使微生物长期处于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态。这些人工造成的环境主要是干燥、低温和缺氧,另外,避光、缺乏营养、添加保护剂或酸度中和剂也能有效提高保藏效果。
生物体的---是随着温度的降低而减缓的。如果低温在0℃以上,这个减缓过程一般是可逆的,即温度回升以后,---的速度也随之恢复。但如温度降至冰点以下时,生物体常因结冰而发生不可恢复的损伤。因为所有的生物体---都含有大量的水(一般在80%左右),细胞器也都悬浮于水溶液中,---过程都是在水溶液或膜和水溶液的界面上进行的,低温生物菌种公司,所以在结冰的过程中,一方面由于水的晶体──冰晶硬度较大,对于生物体内的精细结构会造成机械损伤;另一方面由于水结冰,使细胞内失去了大量可利用的水,造成脱水现象,从而使精细结构发生破坏。
(一)培养基保存法
利用各种斜面和半固体培养基,加上石蜡油保存菌种,是一种简易的保存方法。
1.普通琼脂斜面保存法:肠道菌、等一般---可接种于不含糖的普通琼脂斜面上,斜面底部应加少许无糖肉膏汤,以防干涸。经35℃培养18~24h后,移种于4℃冰箱中,一般可保存一个月,每月传代一次。
2.---琼脂斜面保存法:链球菌、应接种于---琼脂斜面上,35℃培养生长后,置4℃冰箱中保存,链球菌须半个月至1个月移种一次,新分离菌株须2~4天移种一次,以后逐渐延长移种时间,低温生物菌种,在适应后可延至半个月移种一次。
3.巧克力色斜面保存法:宜保存菌,低温生物菌种,并在35℃孵箱中保存,一般每2天移种一次。
4.鸡蛋斜面保存法:适于保存含有vi抗原的沙门菌属及其他含表面抗原的---,一般可保存一个月。
5.半固体穿刺保存法:将---接种于琼脂半固体或琼脂半固体内,经35℃培养18~24h,再以无菌方法加入灭菌的液体石蜡。高度约lcm,置4℃冰箱保存。保存时间可达3~6个月。
(二)干燥保存法
原理是将---体内的水分蒸发掉,使其处于休眠和代谢停滞状态,从而达到长期保存菌种的目的医|学教|育网搜集整理。菌种干燥后低温保存,可保存数年至十几年。
(三)冷冻干燥保存法
本法又称冷冻真空干燥法。它综合利用了各种有利于菌种保存的因素(低温、干燥和缺氧等),是目前有效的菌种保存方法之一。用本法保存的菌种具有成活率高,变---小等优点,低温生物菌种报价,保存期一般3~5年,有的可长达10年以上。
(四)脱脂牛奶保存法
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